В миру Иван (Иоанн). Родился около 1525 года в Старице, по достижении совершеннолетия принял постриг, а впоследствии стал игуменом (с 1566 по 1571 год) в Старицком Успенском монастыре. Так как Старица была одним из центров опричнины, привлёк внимание Ивана Грозного и в 1571 году его перевели в Москву в Симонов монастырь. В 1575 году стал архимандритом царского Новоспасского монастыря в Москве. С 1581 года епископ Коломенский. В Коломне был до 1586 года, когда был назначен архиепископом Ростовским.
С середины 1580-х годов близкий сподвижник Бориса Годунова; при его содействии возведён в митрополиты Московские (1586 год) и 26 января (по старому стилю; 5 февраля по новому стилю) 1589 года поставлен находившимся в Москве константинопольским патриархом Иеремией II в первые Патриархи Московские. В дальнейшем поддерживал политику Бориса. Из важных церковных событий его патриаршества — канонизация Василия Блаженного и Иосифа Волоцкого, распространение христианства в Поволжье, покорённом при Иване Грозном, и в Сибири, присоединённой как раз в годы правления Бориса Годунова.
Смерть Годунова в 1605 году и победа Лжедмитрия I означала и падение Иова. Иов отказался признать самозванца сыном Ивана Грозного и требовал от москвичей верности Фёдору Борисовичу, Лжедмитрий и его сторонники, «которые государю изменили, а тому вору и богоотступнику последуют и именуют его князем Дмитрием» были преданы патриархом анафеме. Так как секретарём Иова некоторое время был Григорий Отрепьев, то исследователи, отождествляющие этого персонажа с Лжедмитрием I, объясняют стремление последнего поскорее удалить Иова из Москвы нежеланием разоблачения. Сам патриарх Иов в своих грамотах называл Лжедмитрия «расстрига, ведомый вор, в мире звали его Юшком Богданов сын Отрепьев, жил у Романовых во дворе и заворовался. …да и у меня, Иова Патриарха, во дворе для книжного письма побыл во дьяконах же. А после того сбежал с Москвы в Литву». Иов был смещён с кафедры и заточён в монастырь в родной Старице ещё до прибытия самозванца в столицу, который направил указание «взять его там в приставы» и содержать «во озлоблении скорбнем». После убийства Фёдора Годунова Иова арестовали за богослужением в Успенском соборе Кремля, сорвали с него патриаршье облачение и как простого монаха отправили в изгнание. После изгнания Иова церковный собор избрал новым московским патриархом грека Игнатия, примкнувшего к сторонникам Лжедмитрия.
В Старице Иов прожил ещё два года, и умер в 1607 году. Перед смертью реабилитированный при Василии Шуйском посетил Москву, но по здоровью (совершенно ослеп) отказался от возвращения на патриарший престол и вернулся в Старицу где скончался 19 июня и был похоронен в Старицком Успенском монастыре. В 1652 году останки Иова перенесены в Успенский собор Московского Кремля.
Тропарь, глас 5:
Православия поборниче, / веры Христовы исповедник был еси, / первоиерарше Церкве Русския, / святителю отче Иове, / за ны Христа Бога моли:/ веру отеческую утвердити, / грехов оставление нам даровати / и подати миру велию милость.
Кондак, глас 6:
Светильник Церкве Русския / и пастырь добрый явился еси, / святителю отче Иове, / молитвою твоею ко Господу / храни землю Российскую / и спаси души наша.