Икона Пресвятой Богородицы представляет собой точную копию образа Богоматери «Владимирская», которая находится в Успенском соборе г. Москвы. Перевезена икона из Звенигорода в 1572 году, и встречал ее игумен Леонид с насельниками святой обители. Владимирскую икону Божией Матери первый раз привезли из города Владимир в Москву в 1395 году при митрополите Киприане, но лишь в 1480 году икона навсегда осталась в этом городе, произошло это при митрополите Геронтии.
В 1588 году посвящается Волоколамской иконе церковь, расположенная у южных врат Иосифо-Волоцкого монастыря. Освятив надвратную церковь в память святых апостолов Петра и Павла, икону перенесли в местный ряд церкви Успения Богородицы Иосифо-Волоцкого монастыря, которая была возведена в конце 17 века в городе Москве. Иконографическое изображение Волоколамской иконы является точной копией образа Божией Матери «Владимирская». На полях иконы в медальонах изображены архангелы Михаил и Гавриил и московские митрополиты Петр и Иона, этим и отличается она от оригинала. В Иосифо-Волоцком монастыре после революции открыли краеведческий музей, но в обители снова появились монашествующие, и жизнь здесь возродилась в 1989 году.
В настоящее время икона находится в музее им. Андрея Рублева, который расположен в Андрониковском монастыре. Помещена в музей Волоколамская икона в1954 году. Икона является чудотворной, об этом отмечено в книгах Иосифо-Волоцкого монастыря.
Перед иконой «Волоколамская» молятся за мир в России и недопущении религиозного раскола, преклоняют колени в молитве перед этой иконой с просьбами об исцелении болезней душевных и телесных.